九樟牌綠泰咀嚼片改善肝病的功效剖析

四川大學華西藥學院，成都，610041

摘要：本文通過展現(xiàn)肝病發(fā)病的機制和現(xiàn)狀，針對目前改善肝病的植物成分的特點，剖析富含多酚化合物和植物多糖的綠泰咀嚼片的配方組成及其相關的生物學實驗和生物芯片技術分析結果，根據(jù)多酚類生物還原劑和植物多糖組份在改善肝功能、抗氧化和增強免疫方面機理的研究進展，就植物綠泰咀嚼片在機體中具有的抗氧化、增強免疫和保肝功效的物質基礎進行了科學綜述。

一、肝病及防治現(xiàn)狀

肝臟是人體內最大的消化腺，是體內物質能量代謝的中心站，是人體凈解毒化血液的重要的代謝器官。據(jù)《2008中國衛(wèi)生統(tǒng)計年鑒》報告，2007年居民主要死亡率下列疾病死亡率占70%《惡性腫瘤、腦血管病、心臟病、內分泌、營養(yǎng)和代謝的疾病、消化系統(tǒng)疾病和傳染病（不含呼吸道結核）》這些疾病都與肝臟和肝臟的功能密切相關，由此可見，肝臟功能健康直接影響機體的健康。

1. 常見肝病與發(fā)病率

根據(jù)我國衛(wèi)生部的統(tǒng)計報告，乙肝發(fā)病率和死亡率均占傳染病中的前5位，中國是乙肝的高發(fā)區(qū)，每年國內因乙肝死亡人數(shù)大于40萬人，乙肝病毒攜帶者近1.3億，慢性乙肝患者超過3000萬人，并有80%以上轉化成肝硬化等嚴重肝病，肝硬化患者超過700萬。脂肪肝是僅次于病毒性肝炎的第二大肝病，其發(fā)病率在中國約1.2億，其中，藥物性脂肪肝占到10%以上，臨床上脂肪肝并發(fā)肝硬化、肝癌的概率是正常人的150倍，而且隨著脂肪肝患者機體免疫力相應下降, 繼發(fā)性感染甲、乙型肝炎的機會也明顯高于正常人。酒精性肝是導致肝硬化的最主要病因，也是十大常見死因之一。我國尚缺乏肝病的全國性大規(guī)模流行病學調查資料，但地區(qū)性流行病學調查顯示我國飲酒人群和酒精性肝病的患病率還在上升。

資料顯示，中國每12人就有1名肝病患者，肝損傷人數(shù)達1.3億人，由于肝損傷病癥導致死亡的人數(shù)近50萬人，其中導致藥物性肝損傷的藥物有900多種，肝損傷尤其是藥物性肝損傷已經(jīng)嚴重地威脅了人們的健康和生命，甚至成為肝癌發(fā)病的重要因素之一，保護肝臟健康已經(jīng)成為擺在我們面前的一個刻不容緩的任務。

2. 肝病藥物發(fā)展的現(xiàn)狀

肝病用藥一般可分為化藥和中藥兩大類，化藥重在治療，中藥重在養(yǎng)護。肝病化藥可分為抗病毒藥物、肝病輔助用藥以及免疫調節(jié)藥等，中藥主要是傳統(tǒng)的保肝護肝的中藥以及抗纖維化中藥等。根據(jù)藥物的主要作用機制，大致可將保肝藥物分為以下10類，如表1。

表1 常見肝病治療藥物的分類

以上藥物治療方法和治療成效各有優(yōu)劣，并存在一定的局限性，而且多數(shù)肝病常需要依靠終生吃藥來控制。如何保護好肝臟是目前臨床治療的關鍵因素之一，針對肝病治療藥物和保健食品的開發(fā)一直是研究人員追求的目標。

3. 多酚類化合物肝病治療現(xiàn)狀

1）多酚類化合物的結構特征與生理功能

多酚，顧名思義就是分子結構具有多個酚羥基的結構，根據(jù)多酚羥基的存在形式又分為單多酚和復合多酚，詳見分類圖，結構中兩個以上的酚羥基，表現(xiàn)出較強的還原性，同時也表現(xiàn)較差的穩(wěn)定性，特別是對光和熱的不穩(wěn)定。

研究資料表明，多酚類化合物獨特的還原性使之具備良好的抗氧化、清除自由基，抑制氧化酶(如脂肪過氧化酶、環(huán)氧合酶及一氧化氮合酶)等活性；特別是通過激活抗氧化酶系(如葡萄糖氧化酶、超氧化物歧化酶、過氧化氫酶、谷胱甘肽過氧化物酶)對肝病的緩解和功能改善已等到科學證實；通過誘導氧化的過渡金屬螯合(如可絡合Ca2+、Cu2+、Fe2+、Fe3+等金屬離子)，從而降低若干需金屬離子催化的反應速率，間接實現(xiàn)抗氧化作用，減輕組織器官老化，動脈硬化、癌癥、炎癥等多種疾病的產(chǎn)生。

圖1 多酚類化合物的分類

進一步的資料顯示，多酚類化合物對氧自由基的強力清除作用(達84%) , 優(yōu)于維生素E和維生素C, 文獻表明沒食子酸和茶多酚復合體清除能力分別是維生素C的67倍和64倍；抗氧化性還表現(xiàn)對脂質過氧化酶的清除，而脂質過氧化在各種肝病的發(fā)病機制中起十分重要的作用, 如對急性肝損傷的保護，研究表明，多酚能夠顯著降低由CCl4、硫代乙酰胺、D-氨基半乳糖、酒精等引起的血清ALT和肝TG升高, 明顯減輕CCl4 引起的肝細胞壞死, 其機理與多酚的抗氧性和抑制肝臟過氧化脂質的形成直接相關；腹腔內注射茶黑素能預防DNA 誘變劑肼( hydr azine)引起的大鼠肝臟損傷, 使血清ALT降低, 肝臟GSH 水平升高, 丙二醛(MDA)水平降低, 減少肼在代謝過程中產(chǎn)生的自由基水平, 提示了茶黑素能拮抗肼引起的肝臟氧化損傷；多酚類化合物通過抑制血漿中低密度脂蛋白(LDL)的氧化實現(xiàn)預防動脈粥樣硬化的發(fā)生，可降低血清膽固醇(TC)、LDL含量及升高HDL含量；明顯降低血清和心肌組織中過氧化脂質及升高紅細胞中超氧化物歧化酶（SOD）的作用；

對脂肪肝防治研究表明高膽固醇的Wistar大鼠模型組同時喂飼沒食子酸, 其血清總膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇水平明顯較對照組低, 而血清中高密度脂蛋白膽固醇( HDL-C ), 證明沒食子酸能明顯減少腸道對膽固醇的吸收(張曉剛等)。對肝纖維化防治CCl4 誘導的肝纖維化與肝脂質過氧化有關(如Sur等證明多酚能抑制CCl4所致的大鼠肝臟脂質過氧化損傷, 降低肝臟脂質過氧化物、GSH、AST、A LT等水平。肖繼平等證明綠茶提取物對CCl4所致大鼠肝硬化中肝臟的MDA、羥脯氨酸明顯降低,使肝壞死和肝纖維化程度減輕, 另使轉化生長因子(TGF-β1)中mRNA在肝組織中的表達降低；)。

除此之外，多酚化合物對引起化膿型感染、燒傷、外傷的金黃色葡萄球菌、變形桿菌、綠膿桿菌等有明顯的抑制作用，并且具備抗突變，調節(jié)免疫，抑制致癌物、促癌劑和癌細胞增殖，誘導癌細胞凋亡，抑制致癌基因表達，調控信號傳導及影響機體酶活性等特性。Saha等從大鼠肝癌模型組中發(fā)現(xiàn)谷胱甘肽-S轉移酶(GST )、GPx、SOD、CAT等酶的活力明顯下降, 當給予茶黃素后，這些酶的活性明顯增強, 而脂質過氧化水平降低，表明多酚對于肝癌細胞的生長有明顯的甚至是選擇性抑制作用。

2）綠原酸的研究現(xiàn)狀

綠原酸是一種具有極高藥用價值和經(jīng)濟價值的純天然提取物，其來源在植物界中分布廣泛，尤其在忍冬科、葵花籽、蒲公英等植物中含量豐富，被國際譽為“植物黃金”；由于綠原酸生理活性極高，性質不穩(wěn)定，是的綠原酸純物質的獲得十分困難，造成綠原酸的生產(chǎn)條件苛刻，在國際市場上的價格也非常昂貴，是目前世界上難以多得的單體多酚類代表型化合物。綠原酸活性廣泛，現(xiàn)代科學對綠原酸生物活性的研究已深入到食品、保健、醫(yī)藥和日用化工等多個領域。如雙黃連注射劑、歐萊雅、薇姿、佰草集、自然堂、資生堂、蘭寇的清爽化妝水、清爽潤膚乳液中富含綠原酸。

在抗氧化方面，綠原酸能形成具有抗氧化作用的氫自由基，是一種高效的酚型生物還原劑，其抗氧化能力位于咖啡酸、對羥苯酸、阿魏酸、丁香酸、丁基羥基茵香醚、抗壞血酸(VC)和生育酚(VE)等之首；可有效消除氧自由基和超氧陰離子等自由基的活性，保護機體免受氧化作用的損害。

在保肝方面，Guifeng Wang 等研究發(fā)現(xiàn)綠原酸、奎尼酸及咖啡酸等可抑制體內外肝炎病毒(HBV)的復制及HBsAg的形成, 并且可降低血清HBV的含量；其抗肝HBV的作用由于拉米夫定陽性藥物(綠原酸的IC50達到1.2±0.4μm , 拉米夫定為0.3±0.04μm)；機理研究表明綠原酸是通過抑制病毒衣殼蛋白的形成來實現(xiàn)的；2011年史秀玲和高銀輝等報道，綠原酸對小鼠急性肝損傷的保護作用，提示綠原酸的作用可能與其能清除體內自由基和抗氧化的作用有關；2012年黃偉煒等報道了綠原酸對阻塞性黃疸大鼠肝纖維化的治療作用及其機制，提示綠原酸在大鼠阻塞性黃疸早、中期有促進HSC 凋亡作用，減輕了阻黃時肝的纖維化，減輕了阻黃時肝的損傷。2011年戚曉淵等報道了綠原酸具有顯著的抗肝纖維化的作用。

在抗心血管病變作用方面，綠原酸具有的自由基清除作用和抗氧化作用，證明了綠原酸對心血管系統(tǒng)產(chǎn)生保護作用；對氧化低密度脂蛋白(OX2LDL)誘導的人內皮細胞損傷具有預防性保護作用；發(fā)現(xiàn)了心肌細胞免受多柔比星(Doxorubicin，DOX)引起的氧化應急損傷的保護作用。

在抗腫瘤作用，資料表明，綠原酸對大腸癌、肝癌和喉癌具有顯著的抑制作用，被認為是癌癥的有效化學防護劑。蔬菜、水果中的多酚類物質綠原酸、咖啡酸等可通過抑制活化酶來抑制致癌和黃曲霉素B  和苯并芘的變異原性；綠原酸還可通過降低致癌物的利用率及其在肝臟中的運輸來達到防癌、抗癌的效果。綠原酸的抗腫瘤體內外藥效學實驗結果以及文獻報道，進一步證實綠原酸為非細胞毒生物反應調節(jié)劑(BRM)類抗腫瘤物質；國外研究研究表明，綠原酸對肺癌、乳腺癌、胃癌、大腸癌、肝癌和口腔癌等多種癌癥具有顯著的抑制作用。近期研究表明，綠原酸可同時通過抑制癌細胞賴以生長細胞增殖通道、免疫通道和能量通道對腫瘤實施多通道控制；2011年周宏灝院士等報道綠原酸可通過抑制細胞生長、調節(jié)細胞周期、誘導凋亡等途徑產(chǎn)生抗癌作用；從分子層面證明了綠原酸是一種具有多渠道、多靶點和多癌種的抗癌物質。

與多酚化合物的生理活性一樣，綠原酸具有明顯的生物活性，主要包括抗氧化、清除自由基、抗菌、抗病毒、抗腫瘤等，由此表現(xiàn)出對機體的保肝利膽、增強免疫、降血壓、降血脂等作用；綠原酸的應用已有上百年歷史，然而由于在植物中含量很低，且極易受到外界的破壞，使得綠原酸的傳統(tǒng)食用中一直處于人體低利用的狀況，成為這一植物精華無法為人們有利用而實現(xiàn)上述明顯的生物活性的一大難以攻克的瓶頸，也是今天多酚類分離純化平臺建立的主要目標。

4. 植物多糖治療肝病現(xiàn)狀

多糖是自然界中含量最豐富的生物聚合物，廣泛存在于植物、動物和微生物組織中。按照來源分類，活性多糖分為植物多糖、動物多糖、微生物多糖等。

多糖是許多中草藥的有效化學成分之一，近年來成為天然藥物研究的一個熱點，廣泛地表現(xiàn)出調節(jié)肝臟功能的作用。多糖對于慢性肝炎的慢性過程中的免疫調節(jié)較為肯定，但對HBV的清除仍是有限的。余昌晏等在體外研究發(fā)現(xiàn)豬苓多糖可抑制人肝癌細胞系(PLC/PRF/5)HBSAg的產(chǎn)生。田庚元等研究表明牛膝多糖本身無抗病毒活性，但其硫酸化產(chǎn)物具有直接抑制HBSAg、HBeAg等的作用。李立新等用轉染了HBV-DNA的HepG2細胞2.2.15細胞株培養(yǎng)方法，來考察豬苓多糖與卡介苗聯(lián)合的直接抗病毒效應。1994年，Park等人發(fā)現(xiàn)靈芝多糖可有效干預膽管阻塞性大鼠肝纖維化的發(fā)展進程。余強等研究黑靈芝多糖對D-半乳糖誘導的衰老小鼠的抗衰老作用，發(fā)現(xiàn)黑靈芝多糖可拮抗小鼠體重的降低和肝臟的萎縮、增強肝臟組織和腦組織SOD、GSH-PX和CAT活性、減少 MAD含量。多糖通過免疫調節(jié)作用來實現(xiàn)對病毒性肝炎的治療已逐漸為人接受。

綜上多種優(yōu)質藥食同源的植物精華，一旦通過高新技術的分離純化和科學組合，加之多酚類生物工程平臺與納米技術的應用，必將引起這些植物精華的生物活性的高效全面的發(fā)揮效能，正是因基于這一點，綠泰咀嚼片在借助于高新技術純化出綠原酸和其他多酚以及多糖精華，突破了上述技術難題，實現(xiàn)高純度多酚和多糖的高效利用，使得機體或者體弱者或肝臟不適者能夠較短周期內快速恢復的現(xiàn)象。

5. 植物九樟牌綠泰咀嚼片的功效研究現(xiàn)狀

經(jīng)四川省疾病控制預防中心功效學試驗和安全性毒理學評價試驗結果表明，九樟牌綠泰咀嚼片對酒精性肝損傷輔助保護作用；按急性毒性分級，屬無毒級；未見致突變作用，也未見動物中毒性損傷改變。用表格表現(xiàn)

2.1綠泰咀嚼片的功效

2.1 .1綠泰咀嚼片對大鼠體重、肝重、肝體比的影響

由表1可見，九樟牌綠泰咀嚼片各劑量組大鼠的初始體重與陰性對照組及模型對照組比較，方差齊（P>0.05），方差分析結果（P>0.05），說明各組動物初始體重是均衡的，各劑量組動物的中期體重、終重、肝重及肝體比與模型對照組比較，無顯著性差異（P>0.05）。

表1   九樟牌綠泰咀嚼片對大鼠體重、肝重、肝體比的影響（±S,n=10）

2.1.2綠泰咀嚼片對大鼠肝勻漿中MDA、還原型GSH、TG含量的影響

由表2可見，模型對照組大鼠肝勻漿中的MDA、還原型GSH、TG含量與陰性對照組比較，經(jīng)t檢驗，MDA、TG含量顯著升高（P＜0.01），還原型GSH含量顯著降低（P＜0.01），表明該模型是成功的，實驗系統(tǒng)可靠。三個劑量組的MDA、還原型GSH 、TG含量與模型對照組比較，可見中、高劑量組的MDA顯著降低（P＜0.05）, 中、高劑量組的還原型GSH升高有顯著性差異（P＜0.05），三個劑量組的TG與模型對照組之間無顯著性差異（P>0.05）。

表2 綠泰咀嚼片對大鼠肝中MDA、還原型GSH、TG含量的影響（±S，n=10）

注：△△表示與陰性對照組比較P<0.01，*表示與模型對照組比較P<0.05

2.1.3肝臟組織病理學檢查結果

有表3結果可知，三個劑量組大鼠的肝細胞脂肪染色評分與模型對照組比較，高劑量組肝細胞脂肪染色評分降低有顯著性差異（P＜0.05）。

   表3   綠泰咀嚼片對大鼠肝臟組織病理學檢查結果  (±S)

注：△△表示與陰性對照組比較P<0.01，*表示與模型對照組比較P<0.05

綠泰咀嚼片連續(xù)30天經(jīng)口灌胃給予雌性SD大鼠后，可見動物生長發(fā)育正常。在酒精性肝損傷模型成立的基礎上，中、高劑量組能顯著降低大鼠肝勻漿中的過氧化脂質降解產(chǎn)物丙二醛含量（P＜0.05）；中、高量組大鼠肝勻漿中的還原型谷胱甘肽含量升高有顯著性差異(P＜0.05）；而各劑量組大鼠肝勻漿中的甘油三酯含量與模型對照組之間無顯著性差異（P>0.05）；高劑量組的肝組織脂肪染色評分降低有顯著性差異(P＜0.05），組織病理學檢查結果為陽性。依據(jù)《保健食品檢驗與評價技術規(guī)范》（2003年版）中之規(guī)定，九樟牌綠泰咀嚼片對雌性SD大鼠具有酒精性肝損傷輔助保護功能。

2.2 急性毒性

給受試物后大、小鼠的一般表現(xiàn)和行為均未見異常，觀察期內未見動物死亡（表4），試驗結束時，處死動物大體解剖肉眼未見異常，九樟牌綠泰咀嚼片對大、小鼠急性經(jīng)口MTD值均大于15000mg/㎏.BW，按急性毒性分級屬無毒級。

表4 九樟牌綠泰咀嚼片對大、小鼠急性經(jīng)口毒性試驗結果（±S，n=10）

2.3 遺傳毒性試驗

Ames試驗研究結果表明，無論在加和不加S9條件下，受試物各劑量組的平均回變菌落數(shù)均未超過溶劑對照組二倍，而陽性對照組的平均回變菌落數(shù)均超過溶劑對照組二倍以上，呈現(xiàn)明顯陽性反應，上述結果表明該受試物未誘導四種菌株回變菌落數(shù)增加。

小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗結果表明，受試物三個劑量組的微核千分率與陰性對照組比較，經(jīng)卡方檢驗，雌雄鼠的微核率均無顯著性差異（P>0.05），而環(huán)磷酰胺陽性對照組則非常顯著高于陰性對照組（P<0.01）。結果未見受試物誘發(fā)小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核率增高。

小鼠精子畸形試驗結果表明，受試物三個劑量組精子畸形率與陰性對照組比較，經(jīng)秩和檢驗無顯著性差異（P> 0.05），而環(huán)磷酰胺陽性對照組則非常顯著高于陰性對照組（P<0.01）。精子畸形類型主要表現(xiàn)以不定形、無鉤為主。上述結果表明受試物未誘發(fā)小鼠精子畸形率增高。

綜上所述，植物多糖和多酚類化合物是維護人體組織機能正常運轉的植物精華，能夠有效地改善肝功能和增強免疫等。因此，純天然綠泰植物咀嚼片有機配方和高科技加工，將植物多糖化合物和多酚化合物科學的集于一體，讓這些植物中的微量物質能夠快速為人們利用，實現(xiàn)保肝利膽，增強免疫力，促進機體健康發(fā)展。